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单细胞悬液制备—不同计数方法原理及比较
发布日期：2022-09-21浏览：
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1.台盼蓝染料
1.1显微镜计数
图1 显微镜台盼蓝染色计数
Countess计数仪与显微镜计数一样，取部分稀释适当的细胞悬液与台盼蓝染料等量混合。后将细胞加入细胞计数板中，调整焦距和曝光等参数，而后通过countess自带的图像分析和软件算法进行计数。Countess可展示细胞活率、细胞浓度、细胞直径分布等数据（如图2）。
图2 Countess计数仪台盼蓝染色计数
2.AO/PI荧光染料
AO/PI荧光染料AO/PI试剂由可以发出绿色荧光的DNA结合染料吖啶橙（AcridineOrange简称AO）和可以发出红色荧光的DNA结合染料碘化丙啶（Propidiumiodide简称PI）组成。两者均是可对DNA染色的细胞核染色试剂。其中 AO可以通过完整的细胞膜，嵌入所有细胞（活细胞和死细胞）的细胞核，呈现绿色荧光；PI只能通过不完整的细胞膜，即死细胞的细胞膜，嵌入所有死细胞的细胞核，呈现红色荧光。当两种染料同时存在于细胞核中，PI通过荧光共振能量转移引起AO荧光的减少。因此，在荧光场中，活细胞的细胞核中仅有AO的存在所以发绿色荧光，被计为活细胞，而细胞膜受损的有核细胞中既有AO又有PI，但是红色荧光盖过了绿色荧光，故被计为死细胞。
Countstar计数取部分稀释适当的细胞悬液与AO/PI染料等量混合，通过仪器自带的图像分析和软件算法进行计数。Countstar可展示细胞活率、细胞浓度、细胞直径分布、结团率、有核率等数据（如图3）。
3.不同计数方式比较
